項(xiàng)目介紹
免疫印跡(western blot)是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性,現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術(shù)。常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分選。
樣本要求
顧客提供組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等,一抗(公司抗體庫(kù)存里若沒(méi)有),干冰或者液氮保存寄送。樣本請(qǐng)注意應(yīng)避免各類(lèi)污染和反復(fù)凍融。
服務(wù)流程
可提供結(jié)果內(nèi)容
(1)告知蛋白質(zhì)濃度及電泳上樣量
(2)原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果
(3)完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)步驟,使用試劑和儀器等
服務(wù)內(nèi)容及周期
常見(jiàn)問(wèn)題
(1)未擴(kuò)出目的條帶
目的蛋白的表達(dá)量過(guò)低;
一抗或者二抗效價(jià)不足;
轉(zhuǎn)膜效率低;
(2)背景過(guò)高
封閉條件不合適;
一抗/二抗?jié)舛冗^(guò)高;
抗體與封閉劑發(fā)生交叉反應(yīng);
洗膜不足;
(3)非特異性條帶
一抗質(zhì)量不佳;
目的蛋白被修飾或者降解,與目的蛋白有共同檢測(cè)表位的剪切體或同一家族成員,目的蛋白可能形成多聚體;
一抗或者二抗?jié)舛冗^(guò)高;
(4)條帶彎曲不平整
電泳遷移速度過(guò)快或遷移溫度過(guò)高