HVBO||不同蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)
蛋白質(zhì)組學(xué)以蛋白質(zhì)組為研究對象，研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)，其本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上全面研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)表達(dá)水平，翻譯后修飾，蛋白-蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的整體而全面的認(rèn)識。蛋白質(zhì)組學(xué)對于深入了解生命現(xiàn)象的本質(zhì)、疾病發(fā)生機理、疾病診斷乃至藥物開發(fā)都具有重大的意義。
隨著蛋白質(zhì)技術(shù)尤其是質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，蛋白質(zhì)組學(xué)研究進入快速發(fā)展階段，各種技術(shù)平臺Label-Free、iTRAQ/TMT、DIA等讓科研工作者迷惑難以選擇，因此小編給大家?guī)聿煌鞍踪|(zhì)組學(xué)技術(shù)介紹，希望幫助各位老師更快更好地理解和熟練應(yīng)用蛋白質(zhì)技術(shù)。
HVBO GENE
Label Free
1、技術(shù)原理
Label Free是一種不依賴于同位素標(biāo)記的非標(biāo)記蛋白組定量技術(shù)，通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)標(biāo)，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度（母離子峰面積），從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進行相對定量。
2、技術(shù)特點
Label Free技術(shù)實驗靈活性強，沒有樣本數(shù)量的限制；蛋白質(zhì)組學(xué)實驗都可以采用此技術(shù)平臺來做；無需同位素標(biāo)記，成本低；可以進行蛋白的“有/無”比較分析；樣本單例上機單例檢測。
iTRAQ/TMT
1、技術(shù)原理
iTRAQ (Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術(shù)都屬于標(biāo)記蛋白質(zhì)組，分別由美國AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),采用不同數(shù)量同位素標(biāo)簽（iTRAQ 4/8標(biāo)，TMT 6/10/16）,通過特異性標(biāo)記多肽的氨基酸基團,一次上機可實現(xiàn)最多15個不同樣本中蛋白質(zhì)的相對定量,是近年來定量蛋白質(zhì)組學(xué)常用的高通量篩選技術(shù)。
同位素標(biāo)簽包括肽反應(yīng)基團，質(zhì)量平衡基團和報告離子基團組成。不同同位素標(biāo)簽可以標(biāo)記不同的樣本，但是由于標(biāo)簽的質(zhì)量相同，在一級質(zhì)譜圖中，標(biāo)記的多肽是無法區(qū)分；然而在二級質(zhì)譜中，報告基團、質(zhì)量平衡基團和肽反應(yīng)基團之間的鍵斷裂，不同同位素標(biāo)簽的同一肽段產(chǎn)生不同質(zhì)量的報告離子，通過比較二級質(zhì)譜圖中不同的報告離子強度就可以對蛋白進行定量檢測。
2、技術(shù)特點
iTRAQ/TMT技術(shù)所有樣本前期混合處理因為具有高平行性；借助于標(biāo)簽檢測，靈敏度好以及定量準(zhǔn)確性高；結(jié)合分級處理大大提高蛋白鑒定深度；樣本多例混樣分組上機，多例同時檢測。
HVBO GENE
DIA
1、技術(shù)原理
DIA（Data-independent acquisition，數(shù)據(jù)非依賴性采集）技術(shù)是蘇黎世聯(lián)邦理工學(xué)院的Ruedi Aebersold團隊研發(fā)的一項全新的質(zhì)譜采集模式技術(shù),基于此技術(shù)衍生出的蛋白組學(xué)簡稱為DIA蛋白組。
數(shù)據(jù)非依賴性掃描模式是將質(zhì)譜整個全掃描范圍分為若干個小窗口，依次對每個窗口的所有離子進行碎裂，使其能夠?qū)呙鑵^(qū)間內(nèi)的所有肽段離子進行高速一級MS掃描再進行二級MS/MS分析，從而降低樣本檢測的缺失值，同時提高定量準(zhǔn)確性和重復(fù)性，實現(xiàn)大樣本隊列中高覆蓋率，高穩(wěn)定，高精準(zhǔn)的蛋白質(zhì)組定量分析。
2、技術(shù)特點
DIA蛋白組專為大樣本數(shù)量分析而設(shè)計，技術(shù)優(yōu)勢有：
（1）全掃描-采集所有的離子信息，包括低豐度蛋白和肽段；
（2）超高定量準(zhǔn)確度高-定量準(zhǔn)確性接近SRM/MRM靶向技術(shù)；
（3）高通量-缺省值CV低，有效蛋白數(shù)據(jù)量更高；
（4）可追溯-不同批次數(shù)據(jù)整合分析和回溯性；
（5）樣本單例上機單例檢測。
技術(shù)對比
以下是定量蛋白質(zhì)組不同技術(shù)平臺的對比圖，以方便大家理解。
除了上圖外，小編還為大家整理了不同蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)之間的異同點。
結(jié)語
華博基因提供包括基因編輯和分子標(biāo)記輔助育種、基因組測序、基因定位克隆、蛋白互作、代謝組分析，基因組數(shù)據(jù)挖掘等技術(shù)服務(wù)，以及土壤、水分和種子等檢測服務(wù)。
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